پزشکی بازساختی و سلول‌های بنیادی

درمان‌های آلوژنیک CART-T پتانسیل افزایش قابل توجه دسترسی بیماران به درمان و کاهش هزینه تولید درمان برای بسیاری از بدخیمی‌ها را دارد. رویکرد آلوژنیک کارآمد به طور چشمگیری به ویرایش صحیح و تمیز وابسته است، امنیت محصول درمانی، وابسته به دقت ابزار مورد استفاده در دست‌ورزی در سلول‌های T می‌باشد.

استفاده از سلول‌های T از دهنده‌ی سالم برای آنتی‌ژن کایمریک گیرنده سلول T  (CAR-T) برای درمان سلول‌های سرطانی، مورد توجه و جذاب است چرا که  سلول‌های سالم T  دهنده‌ می‌توانند منجر به تعداد زیادی درمان در دسترس CAR-T شوند.

برای افزایش امنیت و مدت‌دار بودن درمان‌های آلوژنیک گیرنده سلولT   فرد دهنده‌ و مولکول‌های کمپلکس بافت سازگار کلاس ۱  اغلب با  knock out کردن ژن TRBC  یا TRAC  و B2M   حذف می‌شوند. با این وجود ابزارهای ویرایش ژنوم مانند کریسپر دارای خطا هستند که ممکن است منجر به جهش‌های غیر هدفمند گردد. به علاوه بسیاری از تکنولوژی‌های ویرایش ژنوم نیازمند فعال شدن سلول T  هستند که منجر به تولید تعداد کم سلول‌های خاطره T  بنیادی مورد انتظار می‌شود.

در این مطالعه یک نوکلئاز هدفمند با دقت بسیار بالا به نام cas-CLOVER معرفی شده است که شامل اتصال بین یک cas9 غیرفعال شده با دامنه‌ی نوکلئازی یک اندونوکلئاز محدودکننده کلاس ll به نام clo051 می‌باشد. این ژن باعث تولید نوکلئازی می‌شود که فعالیت آن با دایمریزه شدن دامنه‌ی نوکلئازی clo051 ارتباط دارد و با شناسایی دو توالی اختصاصی 20 نوکلئوتیدی  توسط RNA راهنما فعال می‌شود. cas-CLOVER  فعالیت نوکلئازی غیرهدفمند بسیار کمی دارد. در ارتباط با ترنسپوزون  piggyBac برای تولید یک CAR اختصاصی برای بلوغ آنتی‌ژن سلول B (BCMA) ، cas-CLOVER می‌تواند یک کاندید بسیار خوب و یک تولیدکننده ایمن  سلول‌های CAR-T باشد.

منبع:

https://www.genengnews.com/topics/genome-editing/crispr-cas9-alternatives-cutting-through-the-boundaries-of-gene-editing/

https://www.cell.com/molecular-therapy-family/nucleic-acids/fulltext/S2162-2531(22)00155-X